Προσαρμοσμένη ινσουλίνη αρουραίων όπως τη δεσμευτική πρωτεΐνη 3 εξάρτηση 96 παράγοντα Groeth της ELISA εξάρτηση της ELISA σάντουιτς φρεατίων IGFBP3

Προσαρμοσμένη ινσουλίνη αρουραίων όπως τη δεσμευτική πρωτεΐνη 3 εξάρτηση 96 παράγοντα Groeth της ELISA εξάρτηση της Elisa σάντουιτς φρεατίων IGFBP3

Cat.No Ε1613Ra

Τυποποιημένη σειρά καμπυλών: 2ng/ml - 600ng/ml

Ευαισθησία: 0.93ng/ml

Μέγεθος: 96 φρεάτια

Αποθήκευση: Αποθηκεύστε τα αντιδραστήρια σε 2-8°C. Για την έξι μηνών αποθήκευση αναφερθείτε στην ημερομηνία λήξης το κρατά σε -20°C. αποφεύγει τους επαναλαμβανόμενους thaw κύκλους. Εάν τα μεμονωμένα αντιδραστήρια ανοίγουν συνιστάται η εξάρτηση να χρησιμοποιείται μέσα σε 1 μήνα.

*This το προϊόν είναι για την ερευνητική χρήση μόνο, όχι για τη χρήση στις διαδικασίες διαγνώσεων. Είναι συστήνει ιδιαίτερα να διαβάσει αυτήν την οδηγία εξ ολοκλήρου πριν τη χρήση.

Προοριζόμενη χρήση

Αυτή η εξάρτηση σάντουιτς είναι για την ακριβή ποσοτική ανίχνευση της ινσουλίνης αρουραίων όπως τη δεσμευτική πρωτεΐνη 3 παράγοντα Groeth (επίσης γνωστή ως IGFBP3) στον ορό, πλάσμα, supernates κυτταροκαλλιέργειας, κύτταρο lysates, ομοιογένειες ιστού.

Αρχή δοκιμής

Αυτή η εξάρτηση είναι μια ένζυμο-συνδεμένη Immunosorbent δοκιμή (ELISA). Το πιάτο έχει καλυφθεί προηγουμένως με το αντίσωμα αρουραίων IGFBP3. IGFBP3 παρουσιάστε στο δείγμα προστίθεται και δεσμεύει στα αντισώματα που ντύνονται στα φρεάτια. Και έπειτα το αντίσωμα αρουραίων IGFBP3 προστίθεται και δεσμεύει σε IGFBP3 στο δείγμα. Κατόπιν streptavidin-HRP προστίθεται και δεσμεύει στο αντίσωμα Biotinylated IGFBP3. Μετά από την επώαση αποδεσμευμένο streptavidin-HRP πλένεται μακριά κατά τη διάρκεια ενός βήματος πλύσης. Η λύση υποστρωμάτων προστίθεται έπειτα και το χρώμα αναπτύσσεται αναλογικά προς το ποσό αρουραίου IGFBP3. Η αντίδραση ολοκληρώνεται από την προσθήκη της όξινης λύσης στάσεων και η απορροφητικότητα μετριέται σε 450 NM.

Αντιδραστήριο παρεχόμενο

Προφυλάξεις

• Πριν από τη χρήση, η εξάρτηση και το δείγμα πρέπει να θερμαθούν φυσικά στη θερμοκρασία δωματίου 30 λεπτά.
• Αυτή η οδηγία πρέπει να ακολουθηθεί αυστηρά στο πείραμα.
• Μόλις αφαιρεθεί ο επιθυμητός αριθμός λουρίδων, ξανασφραγίστε αμέσως την τσάντα για να προστατεύσετε παραμένει από την επιδείνωση. Καλύψτε όλα τα αντιδραστήρια όταν όχι σε λειτουργία.
• Σιγουρευτείτε την εισαγωγή στο σιφώνιο της διαταγής και του ποσοστού προσθήκης από το καλά--φρεάτιο κατά τον εισαγωγή στο σιφώνιο των αντιδραστηρίων.
• Εισάγετε στο σιφώνιο τις άκρες και sealer πιάτων πρέπει υπό εξέταση να είναι καθαρό και μίας χρήσης για να αποφύγει την παράλληλη μόλυνση.
• Αποφύγετε τα αντιδραστήρια από τις διαφορετικές batch από κοινού.
• Η λύση Β υποστρωμάτων είναι ευαίσθητη στο φως, δεν εκθέτει τη λύση Β υποστρωμάτων στο φως για πολύ καιρό.
• Η λύση στάσεων περιέχει το οξύ. Παρακαλώ φορέστε την προστασία τη ματιών, χεριών και δερμάτων κατά χρησιμοποίηση αυτού του υλικού. Αποφύγετε την επαφή του δέρματος ή των βλεννωδών μεμβρανών με το αντιδραστήριο εξαρτήσεων.
• Η εξάρτηση δεν πρέπει να χρησιμοποιηθεί πέρα από την ημερομηνία λήξης.

Προετοιμασία αντιδραστηρίων

Όλα τα αντιδραστήρια πρέπει να παρουσιαστούν στη θερμοκρασία δωματίου πριν τη χρήση.

Τα πρότυπα ανασυγκροτούν το 120μl των προτύπων (800ng/ml) με 120μl τυποποιημένο diluent για να παραγάγουν μια τυποποιημένη λύση αποθεμάτων 400ng/ml. Επιτρέψτε στα πρότυπα για να καθίσετε για 15 mins με την ευγενή αναταραχή πριν από την παραγωγή των διαλύσεων. Προετοιμάστε τα διπλά τυποποιημένα σημεία με σειριακά να αραιώσει την τυποποιημένη λύση αποθεμάτων (400ng/ml) 1:2 με τυποποιημένο diluent για τις λύσεις να παραγάγει 200ng/ml, 100ng/ml, 50ng/ml και 25ng/ml. Τυποποιημένο diluent χρησιμεύει ως τα μηά πρότυπα (0 ng/ml). Οποιαδήποτε υπόλοιπη λύση πρέπει να παγώσει σε -20℃ και να χρησιμοποιηθεί μέσα σε έναν μήνα. Η διάλυση των τυποποιημένων λύσεων προτεινόμενων είναι η ακόλουθη:

Απομονωτής αραιό 20ml πλυσίματος της συμπύκνωσης 30x απομονωτών πλυσίματος εξιοντισμένος ή αποσταγμένο νερό για να παραγάγει 500 μιλ. του απομονωτή πλυσίματος 1x. Εάν τα κρύσταλλα έχουν διαμορφώσει στη συμπύκνωση, το μίγμα ήπια μέχρι τα κρύσταλλα έχει διαλύσει εντελώς.

Διαδικασία δοκιμής

1. Προετοιμάστε όλα τα αντιδραστήρια, τις τυποποιημένες λύσεις και τα δείγματα όπως καθοδηγείται. Φέρτε όλα τα αντιδραστήρια στη θερμοκρασία δωματίου πριν τη χρήση. Η δοκιμή εκτελείται στη θερμοκρασία δωματίου.

2. Καθορίστε τον αριθμό λουρίδων που απαιτούνται για τη δοκιμή. Παρεμβάλτε τις λουρίδες στα πλαίσια για τη χρήση. Οι αχρησιμοποίητες λουρίδες πρέπει να αποθηκευτούν σε 2-8°C.

3. Προσθέστε τα πρότυπα 50μl στα πρότυπα καλά. Σημείωση: Μην προσθέστε το αντίσωμα στα πρότυπα καλά επειδή η τυποποιημένη λύση περιέχει το αντίσωμα.

4. Προσθέστε δείγμα στο δείγμα τα φρεάτια 40μl και προσθέτει έπειτα το αντίσωμα αντι-IGFBP3 10μl στα φρεάτια δειγμάτων, κατόπιν προσθέστε 50μl streptavidin-HRP στα φρεάτια δειγμάτων και τα τυποποιημένα φρεάτια (μη κενός έλεγχος καλά). Μίγμα καλά. Καλύψτε το πιάτο με sealer. Επωάστε 60 λεπτά σε 37°C.

5. Αφαιρέστε sealer και πλύντε το πιάτο 5 φορές με τον απομονωτή πλυσίματος. Ενυδατώστε τα φρεάτια με τουλάχιστον τον απομονωτή πλυσίματος 0,35 μιλ. για 30 δευτερόλεπτα σε 1 λεπτό για κάθε πλύσιμο. Για την αυτοματοποιημένη πλύση, απορροφήστε όλα τα φρεάτια και πλύντε 5 φορές με τον απομονωτή πλυσίματος, που υπερχειλίζει τα φρεάτια με τον απομονωτή πλυσίματος. Λεκιάστε το πιάτο επάνω στις πετσέτες εγγράφου ή άλλο απορροφητικό υλικό.

6. Προσθέστε τη λύση Α υποστρωμάτων 50μl σε κάθε ένα καλά και προσθέστε έπειτα τη λύση Β υποστρωμάτων 50μl σε κάθε ένα καλά. Επωάστε το πιάτο που καλύπτεται με νέο sealer για 10 λεπτά σε 37°C στο σκοτάδι.

7. Προσθέστε τη λύση στάσεων 50μl σε κάθε μια καλά, το μπλε χρώμα θα αλλάξει σε κίτρινο αμέσως.

8. Καθορίστε την οπτική πυκνότητα (αξία OD) κάθε μια καλά αμέσως χρησιμοποιώντας έναν αναγνώστη microplate που τίθεται 450 NM μέσα σε 10 μενουέτα μετά από να προσθέσει τη λύση στάσεων.

Περίληψη

1. Προετοιμάστε όλα τα αντιδραστήρια, τα δείγματα και τα πρότυπα.

2. Προσθέστε το δείγμα και το αντιδραστήριο της ELISA σε κάθε ένα καλά. Επωάστε για 1 ώρα σε 37°C.

3. Πλύντε το πιάτο 5 φορές.

4. Προσθέστε τη λύση Α και Β. Incubate υποστρωμάτων για 10 λεπτά σε 37°C.

5. Προσθέστε τη λύση στάσεων και το χρώμα αναπτύσσεται.

6. Διαβάστε την αξία OD μέσα σε 10 λεπτά.

Υπολογισμός του αποτελέσματος

Κατασκευάστε μια τυποποιημένη καμπύλη με τη χάραξη του μέσου OD για κάθε πρότυπα στον κάθετο (ω) άξονα ενάντια στη συγκέντρωση στον οριζόντιο (X) άξονα και επισύρετε την προσοχή μια καλής εφαρμογής καμπύλη μέσω των σημείων στη γραφική παράσταση. Αυτοί οι υπολογισμοί μπορούν να εκτελεσθούν καλύτερα με το βασισμένο σε υπολογιστή καμπύλη-κατάλληλο λογισμικό και η καλής εφαρμογής γραμμή μπορεί να καθοριστεί από την ανάλυση οπισθοδρόμησης.

Referances

«ΚΑΝΕΝΑ παιχνίδι ένας ρόλος στις LPS-προκληθείσες μειώσεις στην κυκλοφορία του igf-ι και igfbp-3 και η έκφραση γονιδίων τους στο συκώτι.»
Priego Τ., Ibanez de Caceres Ι., Martin A.I., Villanua M.A., Lopez-Calderon Α.
AM. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 286: E50- 6(2004)