Προσαρμοσμένη ανθρώπινη Elisa εξάρτηση 96 Sortilin φρεάτια, εξάρτηση της Elisa σάντουιτς Sort1

Προσαρμοσμένη ανθρώπινη εξάρτηση 96 Sortilin ELISA υψηλές εξαρτήσεις της ELISA σάντουιτς ιδιομορφίας SORT1 φρεατίων
 
Cat.No Ε3966HU
Τυποποιημένη σειρά καμπυλών: 0.05ng/ml - 20ng/ml
Ευαισθησία: 0.024ng/ml
Μέγεθος: 96 φρεάτια
Αποθήκευση: Αποθηκεύστε τα αντιδραστήρια σε 2-8°C. Για την έξι μηνών αποθήκευση αναφερθείτε στην ημερομηνία λήξης το κρατά σε -20°C. αποφεύγει τους επαναλαμβανόμενους thaw κύκλους. Εάν τα μεμονωμένα αντιδραστήρια ανοίγουν συνιστάται η εξάρτηση να χρησιμοποιείται μέσα σε 1 μήνα.
*This το προϊόν είναι για την ερευνητική χρήση μόνο, όχι για τη χρήση στις διαδικασίες διαγνώσεων. Είναι συστήνει ιδιαίτερα να διαβάσει αυτήν την οδηγία εξ ολοκλήρου πριν τη χρήση.
 
Ακρίβεια
Η ακρίβεια δια--δοκιμής (ακρίβεια μέσα σε μια δοκιμή) τρία δείγματα της γνωστής συγκέντρωσης εξετάστηκε σε ένα πιάτο για να αξιολογήσει την ακρίβεια δια--δοκιμής.
Η ακρίβεια διά-δοκιμής (ακρίβεια μεταξύ των δοκιμών) τρία δείγματα της γνωστής συγκέντρωσης εξετάστηκε στις χωριστές δοκιμές για να αξιολογήσει την ακρίβεια διά-δοκιμής.
Βιογραφικό σημείωμα (%) = SD/mean Χ 100
Δια--δοκιμή: Βιογραφικό σημείωμα<8>
Διά-δοκιμή: Βιογραφικό σημείωμα<10>
 
Προοριζόμενη χρήση
Αυτή η εξάρτηση σάντουιτς είναι για την ακριβή ποσοτική ανίχνευση ανθρώπινου Sortilin (επίσης γνωστού ως SORT1) στον ορό, πλάσμα, supernates κυτταροκαλλιέργειας, κύτταρο lysates, ομοιογένειες ιστού.
 
Το υλικό απαίτησε αλλά παρεχόμενος

• 37°C±0.5°C επωαστήρας
• Απορροφητικό έγγραφο
• Σιφώνια ακρίβειας και μίας χρήσης άκρες σιφωνίων
• Καθαροί σωλήνες
• Εξιοντισμένος ή αποσταγμένο νερό
• Αναγνώστης Microplate με 450 το φίλτρο μήκους κύματος ± 10nm

 
Προφυλάξεις

• Πριν από τη χρήση, η εξάρτηση και το δείγμα πρέπει να θερμαθούν φυσικά στη θερμοκρασία δωματίου 30 λεπτά.
• Αυτή η οδηγία πρέπει να ακολουθηθεί αυστηρά στο πείραμα.
• Μόλις αφαιρεθεί ο επιθυμητός αριθμός λουρίδων, ξανασφραγίστε αμέσως την τσάντα για να προστατεύσετε παραμένει από την επιδείνωση. Καλύψτε όλα τα αντιδραστήρια όταν όχι σε λειτουργία.
• Σιγουρευτείτε την εισαγωγή στο σιφώνιο της διαταγής και του ποσοστού προσθήκης από το καλά--φρεάτιο κατά τον εισαγωγή στο σιφώνιο των αντιδραστηρίων.
• Εισάγετε στο σιφώνιο τις άκρες και sealer πιάτων πρέπει υπό εξέταση να είναι καθαρό και μίας χρήσης για να αποφύγει την παράλληλη μόλυνση.
• Αποφύγετε τα αντιδραστήρια από τις διαφορετικές batch από κοινού.
• Η λύση Β υποστρωμάτων είναι ευαίσθητη στο φως, δεν εκθέτει τη λύση Β υποστρωμάτων στο φως για πολύ καιρό.
• Η λύση στάσεων περιέχει το οξύ. Παρακαλώ φορέστε την προστασία τη ματιών, χεριών και δερμάτων κατά χρησιμοποίηση αυτού του υλικού. Αποφύγετε την επαφή του δέρματος ή των βλεννωδών μεμβρανών με το αντιδραστήριο εξαρτήσεων.
• Η εξάρτηση δεν πρέπει να χρησιμοποιηθεί πέρα από την ημερομηνία λήξης.

 
Συλλογή δειγμάτων
Ο ορός επιτρέπει στον ορό για να σβολιάσει για 10-20 λεπτά στη θερμοκρασία δωματίου. Υποβάλτε σε φυγοκέντρωση σε 2000-3000 περιστροφή/λεπτό για 20 λεπτά.
 
Το πλάσμα συλλέγει το πλάσμα χρησιμοποιώντας EDTA ή την ηπαρίνη ως αντιπηκτικό. Υποβάλτε τα δείγματα σε φυγοκέντρωση για 15 λεπτά σε 2000-3000 περιστροφή/λεπτό σε 2 - 8°C μέσα σε 30 λεπτά από τη συλλογή.
 
Τα ούρα συλλέγουν από τον αποστειρωμένο σωλήνα. Υποβάλτε σε φυγοκέντρωση σε 2000-3000 περιστροφή/λεπτό για περίπου 20 λεπτά. Κατά τη συλλογή του pleuroperitoneal ρευστού και εγκεφαλονωτιαίυ ρευστού, παρακαλώ ακολουθήστε τις διαδικασίες προαναφερθείσες.
 
Το υπερκείμενο νερό κυτταροκαλλιέργειας συλλέγει από τους αποστειρωμένους σωλήνες κατά το εξέταση εκκρίνει τα συστατικά. Υποβάλτε σε φυγοκέντρωση σε 2000-3000 περιστροφή/λεπτό για περίπου 20 λεπτά. Συλλέξτε τα supernatants προσεκτικά. Κατά την εξέταση των συστατικών μέσα στο κύτταρο, χρησιμοποιήστε PBS (pH 7.2-7.4) για να αραιώσετε την αναστολή κυττάρων στη συγκέντρωση κυττάρων περίπου 1 million/ml. Βλάψτε τα κύτταρα μέσω των επαναλαμβανόμενων freeze-thaw κύκλων για να αφήσετε έξω τα εσωτερικά συστατικά. Υποβάλτε σε φυγοκέντρωση σε 2000-3000 περιστροφή/λεπτό για περίπου 20 λεπτά.
 
Ιστοί ξεβγαλμάτων ιστού σε PBS (pH 7,4) για να αφαιρέσει το υπερβολικό αίμα λεπτομερώς και να ζυγίσει πριν από την ομογενοποίηση. Κομματιάστε τους ιστούς και τους ομογενοποιήστε σε PBS (pH7.4) με homogenizer γυαλιού στον πάγο. Thaw σε 2-8°C ή το πάγωμα σε -20°C. υποβάλλει σε φυγοκέντρωση σε 2000-3000 περιστροφή/λεπτό για περίπου 20 λεπτά.
 
Προετοιμασία αντιδραστηρίων
Όλα τα αντιδραστήρια πρέπει να παρουσιαστούν στη θερμοκρασία δωματίου πριν τη χρήση.
Τα πρότυπα ανασυγκροτούν το 120μl των προτύπων (24ng/ml) με 120μl τυποποιημένο diluent για να παραγάγουν μια τυποποιημένη λύση αποθεμάτων 12ng/ml. Επιτρέψτε στα πρότυπα για να καθίσετε για 15 mins με την ευγενή αναταραχή πριν από την παραγωγή των διαλύσεων. Προετοιμάστε τα διπλά τυποποιημένα σημεία με σειριακά να αραιώσει την τυποποιημένη λύση αποθεμάτων (12ng/ml) 1:2 με τυποποιημένο diluent για τις λύσεις να παραγάγει 6ng/ml, 3ng/ml, 1.5ng/ml και 0.75ng/ml. Τυποποιημένο diluent χρησιμεύει ως τα μηά πρότυπα (0 ng/ml). Οποιαδήποτε υπόλοιπη λύση πρέπει να παγώσει σε -20°C και να χρησιμοποιηθεί μέσα σε έναν μήνα. Η διάλυση των τυποποιημένων λύσεων προτεινόμενων είναι η ακόλουθη:
 

 
Απομονωτής αραιό 20ml πλυσίματος της συμπύκνωσης 30x απομονωτών πλυσίματος εξιοντισμένος ή αποσταγμένο νερό για να παραγάγει 500 μιλ. του απομονωτή πλυσίματος 1x. Εάν τα κρύσταλλα έχουν διαμορφώσει στη συμπύκνωση, το μίγμα ήπια μέχρι τα κρύσταλλα έχει διαλύσει εντελώς.
 
Referances
«Τη lysosomal κίνηση των πρωτεϊνών το (SAPs) ενεργοποιητών sphingolipid από το sortilin μεσολαβεί.»
Lefrancois S., Zeng J., Χασάν A.J., Canuel Μ., ηθικά C.R.
EMBO J. 22:6430 6437(2003)