Εξάρτηση αρουραίων GHRL ELISA 96 φρεατίων με 40ng/L - τυποποιημένη σειρά καμπυλών 12000ng/L

εξάρτηση αρουραίων GHRL ELISA ιδιομορφίας και ευαισθησίας 96 φρεατίων
 
Cat.No E0896Ra
Τυποποιημένη σειρά καμπυλών: 40ng/L - 12000ng/L
Ευαισθησία: 20.56ng/L
Μέγεθος: 96 φρεάτια
Αποθήκευση: Αποθηκεύστε τα αντιδραστήρια σε 2-8°C. Για την έξι μηνών αποθήκευση αναφερθείτε στην ημερομηνία λήξης το κρατά σε -20°C. αποφεύγει τους επαναλαμβανόμενους thaw κύκλους. Εάν τα μεμονωμένα αντιδραστήρια ανοίγουν συνιστάται η εξάρτηση να χρησιμοποιείται μέσα σε 1 μήνα.
* Αυτό το προϊόν είναι για την ερευνητική χρήση μόνο, όχι για τη χρήση στις διαδικασίες διαγνώσεων. Είναι συστήνει ιδιαίτερα να διαβάσει αυτήν την οδηγία εξ ολοκλήρου πριν τη χρήση.
 
Αρχή δοκιμής
Αυτή η εξάρτηση είναι μια ένζυμο-συνδεμένη Immunosorbent δοκιμή (ELISA). Το πιάτο έχει καλυφθεί προηγουμένως με το αντίσωμα αρουραίων GHRL. GHRL παρουσιάζει στο δείγμα προστίθεται και δεσμεύει στα αντισώματα που ντύνονται στα φρεάτια. Και έπειτα το αντίσωμα αρουραίων GHRL προστίθεται και δεσμεύει σε GHRL στο δείγμα. Κατόπιν streptavidin-HRP προστίθεται και δεσμεύει στο αντίσωμα Biotinylated GHRL. Μετά από την επώαση αποδεσμευμένο streptavidin-HRP πλένεται μακριά κατά τη διάρκεια ενός βήματος πλύσης. Η λύση υποστρωμάτων προστίθεται έπειτα και το χρώμα αναπτύσσεται αναλογικά προς το ποσό αρουραίου GHRL. Η αντίδραση ολοκληρώνεται από την προσθήκη της όξινης λύσης στάσεων και η απορροφητικότητα μετριέται σε 450 NM.
 
Συλλογή δειγμάτων
Ο ορός επιτρέπει στον ορό για να σβολιάσει για 10-20 λεπτά στη θερμοκρασία δωματίου. Υποβάλτε σε φυγοκέντρωση σε 2000-3000 περιστροφή/λεπτό για 20 λεπτά.
 
Το πλάσμα συλλέγει το πλάσμα χρησιμοποιώντας EDTA ή την ηπαρίνη ως αντιπηκτικό. Υποβάλτε τα δείγματα σε φυγοκέντρωση για 15 λεπτά σε 2000-3000 περιστροφή/λεπτό σε 2 - 8°C μέσα σε 30 λεπτά από τη συλλογή.
 
Τα ούρα συλλέγουν από τον αποστειρωμένο σωλήνα. Υποβάλτε σε φυγοκέντρωση σε 2000-3000 περιστροφή/λεπτό για περίπου 20 λεπτά. Κατά τη συλλογή του pleuroperitoneal ρευστού και εγκεφαλονωτιαίυ ρευστού, παρακαλώ ακολουθήστε τις διαδικασίες προαναφερθείσες.
 
Το υπερκείμενο νερό κυτταροκαλλιέργειας συλλέγει από τους αποστειρωμένους σωλήνες κατά το εξέταση εκκρίνει τα συστατικά. Υποβάλτε σε φυγοκέντρωση σε 2000-3000 περιστροφή/λεπτό για περίπου 20 λεπτά. Συλλέξτε τα supernatants προσεκτικά. Κατά την εξέταση των συστατικών μέσα στο κύτταρο, χρησιμοποιήστε PBS (pH 7.2-7.4) για να αραιώσετε την αναστολή κυττάρων στη συγκέντρωση κυττάρων περίπου 1 million/ml. Βλάψτε τα κύτταρα μέσω των επαναλαμβανόμενων freeze-thaw κύκλων για να αφήσετε έξω τα εσωτερικά συστατικά. Υποβάλτε σε φυγοκέντρωση σε 2000-3000 περιστροφή/λεπτό για περίπου 20 λεπτά.
 
Ιστοί ξεβγαλμάτων ιστού σε PBS (pH 7,4) για να αφαιρέσει το υπερβολικό αίμα λεπτομερώς και να ζυγίσει πριν από την ομογενοποίηση. Κομματιάστε τους ιστούς και τους ομογενοποιήστε σε PBS (pH7.4) με homogenizer γυαλιού στον πάγο. Thaw σε 2-8°C ή το πάγωμα σε -20°C. υποβάλλει σε φυγοκέντρωση σε 2000-3000 περιστροφή/λεπτό για περίπου 20 λεπτά.
 
Σημείωση

• Οι συγκεντρώσεις δειγμάτων πρέπει να προβλεφθούν πρίν χρησιμοποιούνται στη δοκιμή. Εάν η συγκέντρωση δειγμάτων δεν είναι μέσα στη σειρά της τυποποιημένης καμπύλης, οι χρήστες πρέπει να μας έρθουν σε επαφή με για να καθορίσουν το βέλτιστο δείγμα για τα ιδιαίτερα πειράματά τους.

• Τα δείγματα που χρησιμοποιούνται μέσα σε 5 ημέρες πρέπει να αποθηκευτούν στα δείγματα 2-8°C. πρέπει να είναι ή πρέπει να αποθηκευτούν σε -20°C μέσα σε 1 μήνα ή -80°C μέσα σε 6 μήνες. Αποφύγετε τους επαναλαμβανόμενους thaw παγώματος κύκλους.

• Τα δείγματα πρέπει να παρουσιαστούν στη θερμοκρασία δωματίου πρίν αρχίζουν τη δοκιμή.

• Υποβάλτε σε φυγοκέντρωση για να συλλέξετε το δείγμα πριν τη χρήση.

• Τα δείγματα που περιέχουν NaN3 δεν μπορούν να εξεταστούν δεδομένου ότι εμποδίζει τη δραστηριότητα Peroxidase το (HRP) ραδικιών αλόγων.

• Συλλέξτε τα supernatants προσεκτικά. Όταν τα ιζήματα εμφανίστηκαν κατά τη διάρκεια της αποθήκευσης, η φυγοκεντρικότητα πρέπει να εκτελεσθεί πάλι.

* Το δείγμα δεν μπορεί να αραιωθεί με αυτήν την εξάρτηση. Εξ αιτίας του υλικού που χρησιμοποιούμε για να προετοιμάσουμε την εξάρτηση, η παρέμβαση μητρών δειγμάτων μπορεί ψευδώς να πιέσει την ιδιομορφία και την ακρίβεια της δοκιμής.
 
Προετοιμασία αντιδραστηρίων
Όλα τα αντιδραστήρια πρέπει να παρουσιαστούν στη θερμοκρασία δωματίου πριν τη χρήση.
Τα πρότυπα ανασυγκροτούν το 120μl των προτύπων (12800ng/L) με 120μl τυποποιημένο diluent για να παραγάγουν μια τυποποιημένη λύση αποθεμάτων 6400ng/L. Επιτρέψτε στα πρότυπα για να καθίσετε για 15 mins με την ευγενή αναταραχή πριν από την παραγωγή των διαλύσεων. Προετοιμάστε τα διπλά τυποποιημένα σημεία με σειριακά να αραιώσει την τυποποιημένη λύση αποθεμάτων (6400ng/L) 1:2 με τυποποιημένο diluent για τις λύσεις να παραγάγει 3200ng/L, 1600ng/L, 800ng/L και 400ng/L. Τυποποιημένο diluent χρησιμεύει ως τα μηά πρότυπα (0 ng/L). Οποιαδήποτε υπόλοιπη λύση πρέπει να παγώσει σε -20°C και να χρησιμοποιηθεί μέσα σε έναν μήνα. Η διάλυση των τυποποιημένων λύσεων προτεινόμενων είναι η ακόλουθη:
 

 
Απομονωτής αραιό 20ml πλυσίματος της συμπύκνωσης 30x απομονωτών πλυσίματος εξιοντισμένος ή αποσταγμένο νερό για να παραγάγει 500 μιλ. του απομονωτή πλυσίματος 1x. Εάν τα κρύσταλλα έχουν διαμορφώσει στη συμπύκνωση, το μίγμα ήπια μέχρι τα κρύσταλλα έχει διαλύσει εντελώς.
 
Περίληψη

1. Προετοιμάστε όλα τα αντιδραστήρια, τα δείγματα και τα πρότυπα.

2. Προσθέστε το δείγμα και το αντιδραστήριο της ELISA σε κάθε ένα καλά. Επωάστε για 1 ώρα σε 37°C.

3. Πλύντε το πιάτο 5 φορές.

4. Προσθέστε τη λύση Α και Β. Incubate υποστρωμάτων για 10 λεπτά σε 37°C.

5. Προσθέστε τη λύση στάσεων και το χρώμα αναπτύσσεται.

6. Διαβάστε την αξία OD μέσα σε 10 λεπτά.
 
Αναφορές
Baldanzi Γ., Filigheddu Ν., Cutrupi S., Catapano Φ., Bonissoni S., Fubini Α., Malan Δ., Baj Γ., Granata Ρ., Broglio Φ., Papotti Μ., Surico Ν., Bussolino Φ., Isgaard J., Deghenghi Ρ., Sinigaglia Φ., Prat Μ., Muccioli Γ., Ghigo Ε., Graziani Α.
J. κύτταρο βιολ. 159:1029 1037(2002)