Υψηλή εξάρτηση της ELISA καταλάσεων αρουραίων ιδιομορφίας για την ακριβή ποσοτική ανίχνευση

εξάρτηση της ELISA 96 φρεατίων για την υψηλή ιδιομορφία ΓΑΤΩΝ

Cat.No E0869Ra

Τυποποιημένη σειρά καμπυλών: 1ng/ml - 300ng/ml

Ευαισθησία: 0.52ng/ml

Μέγεθος: 96 φρεάτια

Αποθήκευση: Αποθηκεύστε τα αντιδραστήρια σε 2-8°C. Για την έξι μηνών αποθήκευση αναφερθείτε στην ημερομηνία λήξης το κρατά σε -20°C. αποφεύγει τους επαναλαμβανόμενους thaw κύκλους. Εάν τα μεμονωμένα αντιδραστήρια ανοίγουν συνιστάται η εξάρτηση να χρησιμοποιείται μέσα σε 1 μήνα.

* Αυτό το προϊόν είναι για την ερευνητική χρήση μόνο, όχι για τη χρήση στις διαδικασίες διαγνώσεων. Είναι συστήνει ιδιαίτερα να διαβάσει αυτήν την οδηγία εξ ολοκλήρου πριν τη χρήση.

Προοριζόμενη χρήση

Αυτή η εξάρτηση σάντουιτς είναι για την ακριβή ποσοτική ανίχνευση της καταλάσης αρουραίων (επίσης γνωστής ως ΓΑΤΑ) στον ορό, πλάσμα, supernates κυτταροκαλλιέργειας, κύτταρο lysates, ομοιογένειες ιστού.

Αρχή δοκιμής

Αυτή η εξάρτηση είναι μια ένζυμο-συνδεμένη Immunosorbent δοκιμή (ELISA). Το πιάτο έχει καλυφθεί προηγουμένως με το αντίσωμα ΓΑΤΩΝ αρουραίων. Η ΓΑΤΑ παρούσα στο δείγμα προστίθεται και δεσμεύει στα αντισώματα που ντύνονται στα φρεάτια. Και έπειτα το αντίσωμα ΓΑΤΩΝ αρουραίων προστίθεται και δεσμεύει στη ΓΑΤΑ στο δείγμα. Κατόπιν streptavidin-HRP προστίθεται και δεσμεύει στο αντίσωμα ΓΑΤΏΝ Biotinylated. Μετά από την επώαση αποδεσμευμένο streptavidin-HRP πλένεται μακριά κατά τη διάρκεια ενός βήματος πλύσης. Η λύση υποστρωμάτων προστίθεται έπειτα και το χρώμα αναπτύσσεται αναλογικά προς το ποσό ΓΑΤΑΣ αρουραίων. Η αντίδραση ολοκληρώνεται από την προσθήκη της όξινης λύσης στάσεων και η απορροφητικότητα μετριέται σε 450 NM.

Συλλογή δειγμάτων

Ο ορός επιτρέπει στον ορό για να σβολιάσει για 10-20 λεπτά στη θερμοκρασία δωματίου. Υποβάλτε σε φυγοκέντρωση σε 2000-3000 περιστροφή/λεπτό για 20 λεπτά.

Το πλάσμα συλλέγει το πλάσμα χρησιμοποιώντας EDTA ή την ηπαρίνη ως αντιπηκτικό. Υποβάλτε τα δείγματα σε φυγοκέντρωση για 15 λεπτά σε 2000-3000 περιστροφή/λεπτό σε 2 - 8°C μέσα σε 30 λεπτά από τη συλλογή.

Τα ούρα συλλέγουν από τον αποστειρωμένο σωλήνα. Υποβάλτε σε φυγοκέντρωση σε 2000-3000 περιστροφή/λεπτό για περίπου 20 λεπτά. Κατά τη συλλογή του pleuroperitoneal ρευστού και εγκεφαλονωτιαίυ ρευστού, παρακαλώ ακολουθήστε τις διαδικασίες προαναφερθείσες.

Το υπερκείμενο νερό κυτταροκαλλιέργειας συλλέγει από τους αποστειρωμένους σωλήνες κατά το εξέταση εκκρίνει τα συστατικά. Υποβάλτε σε φυγοκέντρωση σε 2000-3000 περιστροφή/λεπτό για περίπου 20 λεπτά. Συλλέξτε τα supernatants προσεκτικά. Κατά την εξέταση των συστατικών μέσα στο κύτταρο, χρησιμοποιήστε PBS (pH 7.2-7.4) για να αραιώσετε την αναστολή κυττάρων στη συγκέντρωση κυττάρων περίπου 1 million/ml. Βλάψτε τα κύτταρα μέσω των επαναλαμβανόμενων freeze-thaw κύκλων για να αφήσετε έξω τα εσωτερικά συστατικά. Υποβάλτε σε φυγοκέντρωση σε 2000-3000 περιστροφή/λεπτό για περίπου 20 λεπτά.

Ιστοί ξεβγαλμάτων ιστού σε PBS (pH 7,4) για να αφαιρέσει το υπερβολικό αίμα λεπτομερώς και να ζυγίσει πριν από την ομογενοποίηση. Κομματιάστε τους ιστούς και τους ομογενοποιήστε σε PBS (pH7.4) με homogenizer γυαλιού στον πάγο. Thaw σε 2-8°C ή το πάγωμα σε -20°C. υποβάλλει σε φυγοκέντρωση σε 2000-3000 περιστροφή/λεπτό για περίπου 20 λεπτά.

Διαδικασία δοκιμής

1. Προετοιμάστε όλα τα αντιδραστήρια, τις τυποποιημένες λύσεις και τα δείγματα όπως καθοδηγείται. Φέρτε όλα τα αντιδραστήρια στη θερμοκρασία δωματίου πριν τη χρήση. Η δοκιμή εκτελείται στη θερμοκρασία δωματίου.

2. Καθορίστε τον αριθμό λουρίδων που απαιτούνται για τη δοκιμή. Παρεμβάλτε τις λουρίδες στα πλαίσια για τη χρήση. Οι αχρησιμοποίητες λουρίδες πρέπει να αποθηκευτούν σε 2-8°C.

3. Προσθέστε τα πρότυπα 50μl στα πρότυπα καλά. Σημείωση: Μην προσθέστε το αντίσωμα στα πρότυπα καλά επειδή η τυποποιημένη λύση περιέχει το αντίσωμα.

4. Προσθέστε δείγμα στο δείγμα τα φρεάτια 40μl και προσθέτει έπειτα το αντίσωμα αντι-γατών 10μl στα φρεάτια δειγμάτων, κατόπιν προσθέστε 50μl streptavidin-HRP στα φρεάτια δειγμάτων και τα τυποποιημένα φρεάτια (μη κενός έλεγχος καλά). Μίγμα καλά. Καλύψτε το πιάτο με sealer. Επωάστε 60 λεπτά σε 37°C.

5. Αφαιρέστε sealer και πλύντε το πιάτο 5 φορές με τον απομονωτή πλυσίματος. Ενυδατώστε τα φρεάτια με τουλάχιστον τον απομονωτή πλυσίματος 0,35 μιλ. για 30 δευτερόλεπτα σε 1 λεπτό για κάθε πλύσιμο. Για την αυτοματοποιημένη πλύση, απορροφήστε όλα τα φρεάτια και πλύντε 5 φορές με τον απομονωτή πλυσίματος, που υπερχειλίζει τα φρεάτια με τον απομονωτή πλυσίματος. Λεκιάστε το πιάτο επάνω στις πετσέτες εγγράφου ή άλλο απορροφητικό υλικό.

6. Προσθέστε τη λύση Α υποστρωμάτων 50μl σε κάθε ένα καλά και προσθέστε έπειτα τη λύση Β υποστρωμάτων 50μl σε κάθε ένα καλά. Επωάστε το πιάτο που καλύπτεται με νέο sealer για 10 λεπτά σε 37°C στο σκοτάδι.

7. Προσθέστε τη λύση στάσεων 50μl σε κάθε μια καλά, το μπλε χρώμα θα αλλάξει σε κίτρινο αμέσως.

8. Καθορίστε την οπτική πυκνότητα (αξία OD) κάθε μια καλά αμέσως χρησιμοποιώντας έναν αναγνώστη microplate που τίθεται 450 NM μέσα σε 10 μενουέτα μετά από να προσθέσει τη λύση στάσεων.

Περίληψη

1. Προετοιμάστε όλα τα αντιδραστήρια, τα δείγματα και τα πρότυπα.
2. Προσθέστε το δείγμα και το αντιδραστήριο της ELISA σε κάθε ένα καλά. Επωάστε για 1 ώρα σε 37°C.

3. Πλύντε το πιάτο 5 φορές.

4. Προσθέστε τη λύση Α και Β. Incubate υποστρωμάτων για 10 λεπτά σε 37°C.

5. Προσθέστε τη λύση στάσεων και το χρώμα αναπτύσσεται.

6. Διαβάστε την αξία OD μέσα σε 10 λεπτά.

Αναφορές

Kim C.H., Choi Χ., Chun Y.S., Kim G.T., πάρκο J.W., M.S. της Kim.
Αψίδα Pflugers. 442:519 525(2001)