48 η ανθρώπινη εξάρτηση της ELISA φρεατίων/96 φρεάτια, στριμώχνει την ανθρώπινη εξάρτηση Leptin ELISA

υψηλή ευαίσθητη εξάρτηση της ELISA 96 φρεατίων για ανθρώπινο LEP

Cat.No Ε1559HU

Τυποποιημένη σειρά καμπυλών: 0.05ng/ml - 10ng/ml

Ευαισθησία: 0.021ng/ml

Μέγεθος: 96 φρεάτια

Αποθήκευση: Αποθηκεύστε τα αντιδραστήρια σε 2-8°C. Για την έξι μηνών αποθήκευση αναφερθείτε στην ημερομηνία λήξης το κρατά σε -20°C. αποφεύγει τους επαναλαμβανόμενους thaw κύκλους. Εάν τα μεμονωμένα αντιδραστήρια ανοίγουν συνιστάται η εξάρτηση να χρησιμοποιείται μέσα σε 1 μήνα.

* Αυτό το προϊόν είναι για την ερευνητική χρήση μόνο, όχι για τη χρήση στις διαδικασίες διαγνώσεων. Είναι συστήνει ιδιαίτερα να διαβάσει αυτήν την οδηγία εξ ολοκλήρου πριν τη χρήση.

Ακρίβεια

Η ακρίβεια δια--δοκιμής (ακρίβεια μέσα σε μια δοκιμή) τρία δείγματα της γνωστής συγκέντρωσης εξετάστηκε σε ένα πιάτο για να αξιολογήσει την ακρίβεια δια--δοκιμής.

Η ακρίβεια διά-δοκιμής (ακρίβεια μεταξύ των δοκιμών) τρία δείγματα της γνωστής συγκέντρωσης εξετάστηκε στις χωριστές δοκιμές για να αξιολογήσει την ακρίβεια διά-δοκιμής.

Βιογραφικό σημείωμα (%) = SD/mean Χ 100

Δια--δοκιμή: Βιογραφικό σημείωμα<8>

Διά-δοκιμή: Βιογραφικό σημείωμα<10>

Προοριζόμενη χρήση

Αυτή η εξάρτηση σάντουιτς είναι για την ακριβή ποσοτική ανίχνευση ανθρώπινου Leptin (επίσης γνωστού ως LEP) στον ορό, πλάσμα, supernates κυτταροκαλλιέργειας, κύτταρο lysates, ομοιογένειες ιστού.

Αντιδραστήριο παρεχόμενο

Σημείωση

• Οι συγκεντρώσεις δειγμάτων πρέπει να προβλεφθούν πρίν χρησιμοποιούνται στη δοκιμή. Εάν η συγκέντρωση δειγμάτων δεν είναι μέσα στη σειρά της τυποποιημένης καμπύλης, οι χρήστες πρέπει να μας έρθουν σε επαφή με για να καθορίσουν το βέλτιστο δείγμα για τα ιδιαίτερα πειράματά τους.
• Τα δείγματα που χρησιμοποιούνται μέσα σε 5 ημέρες πρέπει να αποθηκευτούν στα δείγματα 2-8°C. πρέπει να είναι ή πρέπει να αποθηκευτούν σε -20°C μέσα σε 1 μήνα ή -80°C μέσα σε 6 μήνες. Αποφύγετε τους επαναλαμβανόμενους thaw παγώματος κύκλους.
• Τα δείγματα πρέπει να παρουσιαστούν στη θερμοκρασία δωματίου πρίν αρχίζουν τη δοκιμή.
• Υποβάλτε σε φυγοκέντρωση για να συλλέξετε το δείγμα πριν τη χρήση.
• Τα δείγματα που περιέχουν NaN3 δεν μπορούν να εξεταστούν δεδομένου ότι εμποδίζει τη δραστηριότητα Peroxidase το (HRP) ραδικιών αλόγων.
• Συλλέξτε τα supernatants προσεκτικά. Όταν τα ιζήματα εμφανίστηκαν κατά τη διάρκεια της αποθήκευσης, η φυγοκεντρικότητα πρέπει να εκτελεσθεί πάλι.
• Η αιμόλυση μπορεί πολύ να προσκρούσει στην ισχύ των αποτελεσμάτων της δοκιμής. Πάρτε την προσοχή για να ελαχιστοποιήσετε την αιμόλυση.

Διαδικασία δοκιμής

1. Προετοιμάστε όλα τα αντιδραστήρια, τις τυποποιημένες λύσεις και τα δείγματα όπως καθοδηγείται. Φέρτε όλα τα αντιδραστήρια στη θερμοκρασία δωματίου πριν τη χρήση. Η δοκιμή εκτελείται στη θερμοκρασία δωματίου.
2. Καθορίστε τον αριθμό λουρίδων που απαιτούνται για τη δοκιμή. Παρεμβάλτε τις λουρίδες στα πλαίσια για τη χρήση. Οι αχρησιμοποίητες λουρίδες πρέπει να αποθηκευτούν σε 2-8°C.
3. Προσθέστε τα πρότυπα 50μl στα πρότυπα καλά. Σημείωση: Μην προσθέστε το αντίσωμα στα πρότυπα καλά επειδή η τυποποιημένη λύση περιέχει το αντίσωμα.
4. Προσθέστε δείγμα στο δείγμα τα φρεάτια 40μl και προσθέτει έπειτα το αντίσωμα αντι-LEP 10μl στα φρεάτια δειγμάτων, κατόπιν προσθέστε 50μl streptavidin-HRP στα φρεάτια δειγμάτων και τα τυποποιημένα φρεάτια (μη κενός έλεγχος καλά). Μίγμα καλά. Καλύψτε το πιάτο με sealer. Επωάστε 60 λεπτά σε 37°C.
5. Αφαιρέστε sealer και πλύντε το πιάτο 5 φορές με τον απομονωτή πλυσίματος. Ενυδατώστε τα φρεάτια με τουλάχιστον τον απομονωτή πλυσίματος 0,35 μιλ. για 30 δευτερόλεπτα σε 1 λεπτό για κάθε πλύσιμο. Για την αυτοματοποιημένη πλύση, απορροφήστε όλα τα φρεάτια και πλύντε 5 φορές με τον απομονωτή πλυσίματος, που υπερχειλίζει τα φρεάτια με τον απομονωτή πλυσίματος. Λεκιάστε το πιάτο επάνω στις πετσέτες εγγράφου ή άλλο απορροφητικό υλικό.
6. Προσθέστε τη λύση Α υποστρωμάτων 50μl σε κάθε ένα καλά και προσθέστε έπειτα τη λύση Β υποστρωμάτων 50μl σε κάθε ένα καλά. Επωάστε το πιάτο που καλύπτεται με νέο sealer για 10 λεπτά σε 37°C στο σκοτάδι.
7. Προσθέστε τη λύση στάσεων 50μl σε κάθε μια καλά, το μπλε χρώμα θα αλλάξει σε κίτρινο αμέσως.
8. Καθορίστε την οπτική πυκνότητα (αξία OD) κάθε μια καλά αμέσως χρησιμοποιώντας έναν αναγνώστη microplate που τίθεται 450 NM μέσα σε 10 μενουέτα μετά από να προσθέσει τη λύση στάσεων.

Αναφορές

Ερχομοί D.E., Gade Ρ., Muhleman Δ., Peters W.R., MacMurray J.P.
Μορ. Genet. Metab. 73:204 210(2001)