Προσαρμοσμένη υψηλή ερευνητική χρήση εξαρτήσεων Adiponectin ELISA ευαισθησίας ανθρώπινη

Υψηλή εξάρτηση 96 Adiponectin ELISA ιδιομορφίας και ευαισθησίας ανθρώπινη φρεάτια
 
Cat.No Ε1550HU
Μέγεθος: 96 φρεάτια
Αποθήκευση: Αποθηκεύστε τα αντιδραστήρια σε 2-8°C. Για την έξι μηνών αποθήκευση αναφερθείτε στην ημερομηνία λήξης το κρατά σε -20°C. αποφεύγει τους επαναλαμβανόμενους thaw κύκλους. Εάν τα μεμονωμένα αντιδραστήρια ανοίγουν συνιστάται η εξάρτηση να χρησιμοποιείται μέσα σε 1 μήνα.
* Αυτό το προϊόν είναι για την ερευνητική χρήση μόνο, όχι για τη χρήση στις διαδικασίες διαγνώσεων. Είναι συστήνει ιδιαίτερα να διαβάσει αυτήν την οδηγία εξ ολοκλήρου πριν τη χρήση.
 
Προοριζόμενη χρήση
Αυτή η εξάρτηση σάντουιτς είναι για την ακριβή ποσοτική ανίχνευση ανθρώπινου Adiponectin (επίσης γνωστού ως ADP) στον ορό, πλάσμα, supernates κυτταροκαλλιέργειας, κύτταρο lysates, ομοιογένειες ιστού.
 
Ακρίβεια
Η ακρίβεια δια--δοκιμής (ακρίβεια μέσα σε μια δοκιμή) τρία δείγματα της γνωστής συγκέντρωσης εξετάστηκε σε ένα πιάτο για να αξιολογήσει την ακρίβεια δια--δοκιμής.
Η ακρίβεια διά-δοκιμής (ακρίβεια μεταξύ των δοκιμών) τρία δείγματα της γνωστής συγκέντρωσης εξετάστηκε στις χωριστές δοκιμές για να αξιολογήσει την ακρίβεια διά-δοκιμής.
Βιογραφικό σημείωμα (%) = SD/mean Χ 100
Δια--δοκιμή: Βιογραφικό σημείωμα<8>
Διά-δοκιμή: Βιογραφικό σημείωμα<10>
 
Συλλογή δειγμάτων
Ο ορός επιτρέπει στον ορό για να σβολιάσει για 10-20 λεπτά στη θερμοκρασία δωματίου. Υποβάλτε σε φυγοκέντρωση σε 2000-3000 περιστροφή/λεπτό για 20 λεπτά.
Το πλάσμα συλλέγει το πλάσμα χρησιμοποιώντας EDTA ή την ηπαρίνη ως αντιπηκτικό. Υποβάλτε τα δείγματα σε φυγοκέντρωση για 15 λεπτά σε 2000-3000 περιστροφή/λεπτό σε 2 - 8°C μέσα σε 30 λεπτά από τη συλλογή.
Τα ούρα συλλέγουν από τον αποστειρωμένο σωλήνα. Υποβάλτε σε φυγοκέντρωση σε 2000-3000 περιστροφή/λεπτό για περίπου 20 λεπτά. Κατά τη συλλογή του pleuroperitoneal ρευστού και εγκεφαλονωτιαίυ ρευστού, παρακαλώ ακολουθήστε τις διαδικασίες προαναφερθείσες.
Το υπερκείμενο νερό κυτταροκαλλιέργειας συλλέγει από τους αποστειρωμένους σωλήνες κατά το εξέταση εκκρίνει τα συστατικά. Υποβάλτε σε φυγοκέντρωση σε 2000-3000 περιστροφή/λεπτό για περίπου 20 λεπτά. Συλλέξτε τα supernatants προσεκτικά. Κατά την εξέταση των συστατικών μέσα στο κύτταρο, χρησιμοποιήστε PBS (pH 7.2-7.4) για να αραιώσετε την αναστολή κυττάρων στη συγκέντρωση κυττάρων περίπου 1 million/ml. Βλάψτε τα κύτταρα μέσω των επαναλαμβανόμενων freeze-thaw κύκλων για να αφήσετε έξω τα εσωτερικά συστατικά. Υποβάλτε σε φυγοκέντρωση σε 2000-3000 περιστροφή/λεπτό για περίπου 20 λεπτά.
Ιστοί ξεβγαλμάτων ιστού σε PBS (pH 7,4) για να αφαιρέσει το υπερβολικό αίμα λεπτομερώς και να ζυγίσει πριν από την ομογενοποίηση. Κομματιάστε τους ιστούς και τους ομογενοποιήστε σε PBS (pH7.4) με homogenizer γυαλιού στον πάγο. Thaw σε 2-8°C ή το πάγωμα σε -20°C. υποβάλλει σε φυγοκέντρωση σε 2000-3000 περιστροφή/λεπτό για περίπου 20 λεπτά.
 
Σημείωση

• Οι συγκεντρώσεις δειγμάτων πρέπει να προβλεφθούν πρίν χρησιμοποιούνται στη δοκιμή. Εάν η συγκέντρωση δειγμάτων δεν είναι μέσα στη σειρά της τυποποιημένης καμπύλης, οι χρήστες πρέπει να μας έρθουν σε επαφή με για να καθορίσουν το βέλτιστο δείγμα για τα ιδιαίτερα πειράματά τους.

• Τα δείγματα που χρησιμοποιούνται μέσα σε 5 ημέρες πρέπει να αποθηκευτούν στα δείγματα 2-8°C. πρέπει να είναι ή πρέπει να αποθηκευτούν σε -20°C μέσα σε 1 μήνα ή -80°C μέσα σε 6 μήνες. Αποφύγετε τους επαναλαμβανόμενους thaw παγώματος κύκλους.

• Τα δείγματα πρέπει να παρουσιαστούν στη θερμοκρασία δωματίου πρίν αρχίζουν τη δοκιμή.

• Υποβάλτε σε φυγοκέντρωση για να συλλέξετε το δείγμα πριν τη χρήση.

• Τα δείγματα που περιέχουν NaN3 δεν μπορούν να εξεταστούν δεδομένου ότι εμποδίζει τη δραστηριότητα Peroxidase το (HRP) ραδικιών αλόγων.

• Συλλέξτε τα supernatants προσεκτικά. Όταν τα ιζήματα εμφανίστηκαν κατά τη διάρκεια της αποθήκευσης, η φυγοκεντρικότητα πρέπει να εκτελεσθεί πάλι.

*Sample δεν μπορεί να αραιωθεί με αυτήν την εξάρτηση. Εξ αιτίας του υλικού που χρησιμοποιούμε για να προετοιμάσουμε την εξάρτηση, η παρέμβαση μητρών δειγμάτων μπορεί ψευδώς να πιέσει την ιδιομορφία και την ακρίβεια της δοκιμής.
 
Προετοιμασία αντιδραστηρίων
Τα πρότυπα ανασυγκροτούν το 120μl των προτύπων (64mg/L) με 120μl τυποποιημένο diluent για να παραγάγουν μια τυποποιημένη λύση αποθεμάτων 32mg/L. Επιτρέψτε στα πρότυπα για να καθίσετε για 15 mins με την ευγενή αναταραχή πριν από την παραγωγή των διαλύσεων. Προετοιμάστε τα διπλά τυποποιημένα σημεία με σειριακά να αραιώσει την τυποποιημένη λύση αποθεμάτων (32mg/L) 1:2 με τυποποιημένο diluent για τις λύσεις να παραγάγει 16mg/l, 8mg/L, 4mg/L και 2mg/L. Τυποποιημένο diluent χρησιμεύει ως τα μηά πρότυπα (0 mg/$l*l). Οποιαδήποτε υπόλοιπη λύση πρέπει να παγώσει σε -20°C και να χρησιμοποιηθεί μέσα σε έναν μήνα. Η διάλυση των τυποποιημένων λύσεων προτεινόμενων είναι η ακόλουθη:
 

 
Απομονωτής αραιό 20ml πλυσίματος της συμπύκνωσης 25x απομονωτών πλυσίματος εξιοντισμένος ή αποσταγμένο νερό για να παραγάγει 500 μιλ. του απομονωτή πλυσίματος 1x. Εάν τα κρύσταλλα έχουν διαμορφώσει στη συμπύκνωση, το μίγμα ήπια μέχρι τα κρύσταλλα έχει διαλύσει εντελώς.
 
Περίληψη

1. Προετοιμάστε όλα τα αντιδραστήρια, τα δείγματα και τα πρότυπα.

2. Προσθέστε το δείγμα και το αντιδραστήριο της ELISA σε κάθε ένα καλά. Επωάστε για 1 ώρα σε 37°C.

3. Πλύντε το πιάτο 5 φορές.

4. Προσθέστε τη λύση Α και Β. Incubate υποστρωμάτων για 10 λεπτά σε 37°C.

5. Προσθέστε τη λύση στάσεων και το χρώμα αναπτύσσεται.

6. Διαβάστε την αξία OD μέσα σε 10 λεπτά.
 
Αναφορές
Waki Χ., Yamauchi Τ., Kamon J., Ito Υ., Uchida S., Kita S., Hara Κ., Hada Υ., Vasseur Φ., Froguel Σελ., Kimura S., Nagai Ρ., Kadowaki Τ.
J. βιολ. Χημ. 278:40352 40363(2003)